Egwyddorion Synthesis Asid Niwcleig

Mae'r synthesis asid niwclëig yn cael ei wneud gan ddefnyddio'r dull triglyserid amide sialig cyfnod solet, lle mae pen 3′ y DNA yn cael ei atal rhag symud ar swbstrad cyfnod solet ac mae niwcleotidau yn cael eu hychwanegu i'r cyfeiriad 3′ i 5′ nes bod y darn DNA a ddymunir yn cael ei syntheseiddio. .Mae hyn yn wahanol i synthesis DNA trwy gymhwyso DNA polymeras.

Mae pen 3′ y sylfaen gyntaf yn cael ei ansymudol ar CPG yn ystod synthesis, mae'r 5′-OH o'r sylfaen nesaf wedi'i warchod â di-p-tolyl trityl DMT, mae'r grŵp amino ar y gwaelod wedi'i warchod ag asid benzoig a'r 3′ Yna caiff -OH ei actifadu â chyfansoddyn amino ffosffad.Mae 1 sylfaen o'r 5 5′-OH o 1 sylfaen a 3′-OH o'r sylfaen nesaf yn ffurfio triglyserid ffosffit, sydd wedyn yn cael ei ocsidio ag ïodin i driglyserid ffosffad, mae'r amddiffynnydd ar yr ail fas 5′-OH yn cael ei dynnu gan ychwanegu cylchoedd DM asid dichloroacetig trwy ychwanegu'r sylfaen nesaf, ac ar ôl synthesis mae'r amddiffynnydd ar y 5′-OH yn cael ei dynnu ag asid gwan Mae'r darn wedi'i ddatgysylltu o'r resin solet ag amoniwm hydrocsid crynodedig, mae'r amddiffynnydd yn cael ei dynnu o'r sylfaen gydag amoniwm hydrocsid crynodedig o dan wresogi, mae'r amoniwm hydrocsid yn cael ei dynnu, mae'r darn wedi'i sychu mewn gwactod, ac mae'r asid niwclëig yn cael ei buro gan gromatograffeg hylif neu TUDALEN.

Camau Oligo Synthesis

Dadflocio

Mae'rMae grŵp amddiffyn DMT 5 diwedd yn cael ei ddileu trwy ychwanegu datrysiad TCA.

Ysgogi

Cymysgu'r activator gyda'r monomer oligonucleotide i ffurfio'r monomer oligonucleotide gweithredol canolradd.

Cyplu

Mae'r grŵp hydrocsyl 5-terminal yn adweithio â'r canolradd oligonucleotide gweithredol mewn adwaith cyddwyso gwrth-genhedlol i ffurfio bond triglyserid ffosffit ansefydlog.

Capio 

Mae ychwanegu asiant capio yn perfformio adwaith capio asetyleiddiad gyda gormodedd o grwpiau hydroxyl nad ydynt yn rhan o'r adwaith anwedd.

Ocsidiad 

Mae ychwanegu hydoddiant ïodin sy'n cynnwys dŵr yn adweithio â bondiau ffosffit ansefydlog trwy ocsidiad i ffurfio bondiau triglyserid asid ffosfforig sefydlog.

Holltiad Cyanoethyl

Y cynnyrch asid niwclëig ar ôl synthesis, gan ychwanegu hydoddiant DEA i dynnu'r grŵp cyanoethyl o'r bond triglyserid ffosffad.

Hollti&Ddiogelu

Mae'r darnau asid niwclëig yn cael eu hollti o'r cludwr gwedd solet trwy ychwanegu hydoddiant amoniwm hydrocsid crynodedig ac yna'n cael ei gynhesu i dynnu'r grwpiau amddiffyn o fondiau hydrogen y basau.